單細胞測序核心技術(shù)

BD Rhapsody: 單細胞分析工作流程

1. BD Rhapsody 核心技術(shù)之微孔板

一個(gè)微孔 =   一個(gè)單細胞 + 一個(gè)磁珠

BD Rhapsody Express單細胞分析系統提供的單細胞分割，以微孔為基礎，功能強大。
●   限度一套臺式設備，沒(méi)有射流泵
●   當細胞在重力作用下沉入微孔時(shí)，可以對其進(jìn)行溫和的處理
●   每個(gè)BD Rhapsody微孔板均包括一個(gè)超過(guò)22萬(wàn)個(gè)分區的微孔陣列
●   BD Rhapsody"微孔板體積約為600μL，稀釋細胞懸浮液可直接裝入微孔板，無(wú)需將其濃縮到非常小的體積
●   由于沒(méi)有微流通道，因此不需要擔心通道堵塞的問(wèn)題
●   微孔經(jīng)過(guò)特殊處理，以防止細胞粘附在表面，并進(jìn)行深入的質(zhì)量控制

Rhapsody利用微孔進(jìn)行單細胞分離，屬于Microwell-seq。 20萬(wàn)個(gè)微孔的尺寸被設計成一個(gè)微孔恰好可以容納一個(gè)bead+一個(gè)細胞。

2. BD Rhapsody核心技術(shù)之Barcoded Bead

3. 單細胞文庫制備及測序

Single cell isolation and capture流程圖

4. BD Rhapsody技術(shù)優(yōu)勢

成本更低—— 靶向基因檢測，避免看家基因占用的大量測序數據，大大節省了測序和分析成本。

超高細胞捕獲效率—— 有效細胞捕獲率60%，遠高于市場(chǎng)上目前所有大通量單細胞轉錄組測序技術(shù)。

罕見(jiàn)轉錄本，更高檢出率—— 靶向定制panel，選定特定基因組合，提高UMI計數效率，罕見(jiàn)轉錄本檢測閾值更低。

克服PCR，擴增偏差——引入單細胞測序金標準，BD分子標簽，降低非特異性表達。

實(shí)理更高的分辨率——可以分辨更精細、微觀(guān)的細胞群和細胞亞種群。

反轉錄的磁珠，超常穩存儲——完整cDNA可在磁珠微球結構保存長(cháng)3月(4度)，隨用隨取。

靈活分樣組合——提高樣品通量（最多可12個(gè)樣本同時(shí)建庫，可等分，可隨機組合）；又可以同時(shí)進(jìn)行單細胞蛋白和轉錄組聯(lián)合檢測，大大降低成本的同時(shí)，也為單細胞多組學(xué)研究提供了更高效的平臺。

5. BD Rhapsody產(chǎn)品線(xiàn)overview